品 名:GST-琼脂糖凝胶4B
英文(wén)名:Glutathione NUPharose 4B
目录号:NRPB56L、NRPB56S(预装柱)
规 格:10 mL, 20 mL,50 mL, 100 mL,500 mL, 1 L,10 L, 1 mL预装柱,5 mL预装柱,特殊规格订制
运 输:2 ~ 30℃,常压、避光
贮 存:20%乙醇,2~8℃
保质期:3年
相关介绍:
GST-琼脂糖凝胶4B是一种将谷胱甘肽键合在琼脂糖凝胶微球上形成的生物(wù)亲和层析分(fēn)离介质,主要用(yòng)于谷胱甘肽转移酶标记蛋白(GST融合蛋白)、谷胱甘肽转移酶和谷胱甘肽依赖蛋白的分(fēn)离纯化,通过一步亲和层析,就能(néng)获得高纯度的蛋白。与GST-琼脂糖凝胶FF相比,GST-琼脂糖凝胶4B能(néng)获得更高的载量。
技术指标:
基质 | 4%琼脂糖 |
配基 | 谷胱甘肽 |
配基密度 | ≥20μmol/ml |
平均粒径 | ~90 μm |
蛋白质载量 | 约25mg谷胱甘肽-S-转移酶(28kDa)/ml |
最大流速 | 100 cm/h |
推荐流速 | 10~50 cm/h |
耐反压 | 0.1 MPa |
pH稳定性 | 3-12(長(cháng)时间);3-13(短时间) |
化學(xué)稳定性 | 在以下溶液中稳定:常用(yòng)的水相缓冲液;0.1mol/L NaOH,6mol/L盐酸胍;70%乙醇。 |
使用(yòng)方法:
1. 装柱
1.1 根据分(fēn)离目标性质配制初始缓冲液(平衡液)和洗脱缓冲液。
1.2 将凝胶抽干,并用(yòng)蒸馏水洗涤2次去除保存的乙醇,用(yòng)蒸馏水配成匀浆并脱气。
1.3 将层析柱垂直固定,底端用(yòng)水或缓冲液润湿并保持一段液位。
1.4 用(yòng)玻璃棒引导匀浆沿着柱内壁一次性倒入柱内,使凝胶在柱内自由沉降。
1.5 连结好柱子顶端活动柱头,打开蠕动泵,让缓冲液用(yòng)使用(yòng)时操作流速流过5柱體(tǐ)积,再使用(yòng)1.5倍的操作流速流过5柱體(tǐ)积,调节适配柱头,使其尽量贴近胶面,最后用(yòng)2-3倍柱體(tǐ)积的缓冲液平衡柱子。
注意:(1)所有(yǒu)操作过程不能(néng)引入气泡,保证装胶的均匀度。(3)如无条件做1.2,填料层有(yǒu)气泡,可(kě)进行2次装柱,去除保存的乙醇和气泡。(4)乙醇等试剂配制的溶液需要脱气。
2. 平衡
将平衡缓冲液以操作流速平衡层析柱,观察检测器的变化,直到電(diàn)导、pH等参数不变。推荐的结合平衡缓冲液為(wèi):10mM PBS (140mM NaCl, 2.7mM KCl, 10mM Na2HPO4, 1.8mM KH2PO4, pH 7.4)。
3. 上样
切换转换阀进行上样,上样量根据样品的性质和层析介质的量进行选择,也可(kě)进行線(xiàn)性实验找到最佳上样量;样品的预处理(lǐ):置换缓冲液,澄清过滤(0.45、0.22μm)等。
4. 冲洗
用(yòng)2-3个柱體(tǐ)积的平衡缓冲液冲洗上样后的层析柱,观察检测器的变化,直到電(diàn)导、pH等参数不变,此时未交换的组分(fēn)被清洗出去。
5. 洗脱
一般推荐用(yòng)10mM还原型谷胱甘肽溶液(可(kě)含缓冲成分(fēn))进行洗脱。推荐的洗脱缓冲液為(wèi):50mM Tris-HCl, 10 mM 还原型谷胱甘肽(GSH), pH 8.0。
6. 再生
用(yòng)蒸馏水按操作流速冲洗3-5个柱體(tǐ)积,接着用(yòng)平衡液洗到平衡3-5个柱體(tǐ)积。
若有(yǒu)失活蛋白质或脂类物(wù)质在再生时洗不掉,可(kě)用(yòng)在位清洗(CIP)除去。
7. 在位清洗(CIP)
去除沉淀和变性蛋白:用(yòng)2CV 6M盐酸胍清洗,立即用(yòng)10mM PBS(pH7.4)洗5CV。
去除强疏水蛋白:用(yòng)3-4CV 70%乙醇清洗,立即用(yòng)10mM PBS(pH7.4)洗5CV。
推荐流速 | |||
预装柱體(tǐ)积(ml) | 1 | 5 | 10 |
流速(ml/min) | 0.2 | 1 | 2 |
导購(gòu)指南
中文(wén)名 | 英文(wén)简称 | 货号 | 规格 | 产品描述 |
重力预装柱 | ||||
GST-琼脂糖凝胶4B重力预装柱 | GST NUPharose 4B pre-packed column | NRPB56S-Z11 | 1*1mL | 1支*1ml |
NRPB56S-Z41 | 4*1mL | 4支*1ml | ||
NRPB56S-Z15 | 1*5mL | 1支*5mL | ||
NRPB56S-Z25 | 2*5mL | 2支*5mL | ||
AKTA中压预装柱 | ||||
GST-琼脂糖凝胶4B中压预装柱 | GST NUPharose 4B pre-packed column | NRPB56S-Y11 | 1*1mL | 1支*1ml |
NRPB56S-Y41 | 4*1mL | 4支*1ml | ||
NRPB56S-Y15 | 1*5mL | 1支*5mL | ||
NRPB56S-Y25 | 2*5mL | 2支*5mL | ||
填料 | ||||
GST-琼脂糖凝胶4B | GST NUPharose 4B | NRPB56L-10 | 10mL | 1瓶*10ml |
NRPB56L-20 | 20mL | 1瓶*20ml | ||
NRPB56L-100 | 100mL | 1瓶*100ml | ||
NRPB56L-500 | 500ml | 1瓶*500ml | ||
注:纽龙生物(wù)填料體(tǐ)积為(wèi)实际琼脂糖凝胶體(tǐ)积 |