NRPB42L Strep-Tactin琼脂糖凝胶FF

相关介绍： 

Strep-Tactin琼脂糖凝胶FF是一种将Strep-Tactin键合在琼脂糖凝胶微球上形成的生物(wù)亲和层析分(fēn)离介质，主要用(yòng)于纯化Strep II标签蛋白。Strep II标签為(wèi)8个氨基酸的小(xiǎo)标签（WSHPQFEK），由于标签小(xiǎo)，仅為(wèi)1 kDa左右，一般不影响融合后蛋白质的结构和功能(néng)，常用(yòng)于融合表达蛋白质的检测和纯化。

本产品的配基Strep-Tactin是链霉亲和素（Streptavidin）的突变體(tǐ)，与链霉亲和素相比，Strep-Tactin对Strep II标签的亲和能(néng)力至少强10倍以上，能(néng)够在温和的条件下与Strep II融合蛋白结合和解离。由于Strep-Tacin对Strep II标签具有(yǒu)高度特异性，一般一步纯化就能(néng)获得高纯度的蛋白质样品。

Strep II标签蛋白与凝胶结合后可(kě)使用(yòng)脱硫生物(wù)素竞争方式进行洗脱，该洗脱方式比较温和，一般不会影响蛋白质的性质。如Strep II标签蛋白质能(néng)耐受碱性条件，也可(kě)用(yòng)碱液洗脱，比如10 mM NaOH等。

Strep-Tactin琼脂糖凝胶FF能(néng)耐受较高的碱性条件，可(kě)以用(yòng)0.5 M NaOH进行再生清洗和去除热源等。

另外，2-(4-羟基苯唑)苯甲酸（HABA）也可(kě)用(yòng)于凝胶再生，过量的HABA能(néng)以竞争的方式替换脱硫生物(wù)素，但在无HABA的缓冲液中， Strep-Tactin与HABA会发生解离，从而使HABA脱落，实现再生。

技术指标：

使用(yòng)方法：

1 推荐缓冲液

纯化Strep II标签蛋白

结合缓冲液：100 mM Tris-HCl，150 mM NaCl，1 mM EDTA，pH 8.0；

 　　　　　　或20 mM NaH₂PO₄，280 mM NaCl，6 mM KCl，pH 7.4

洗脱缓冲液：结合缓冲液 + 2.5 mM 脱硫生物(wù)素；

 　　　　　　或10 mM NaOH

再生缓冲液：0.5 M NaOH；

 　　　　　　或结合缓冲液+1 mM HABA

2 样品准备

上柱的样品应尽量保持与结合缓冲液一致。通常可(kě)用(yòng)透析、超滤、稀释等方法处理(lǐ)样品。并且上柱前应过0.45 μm滤膜或高速离心去除不溶物(wù)。

3 样品纯化

3.1 平衡：取适量的Strep-Tactin琼脂糖凝胶FF装入合适的层析柱中，用(yòng)蒸馏水清洗5个柱體(tǐ)积去除保存液，再用(yòng)结合缓冲液平衡5个柱體(tǐ)积，建议流速為(wèi)100 cm/h。

3.2 上样：将准备好的样品上柱，建议流速為(wèi)20 ~ 100 cm/h，可(kě)根据实际结合情况选择流速，能(néng)获得较好的效果。

3.3 再平衡：上样后用(yòng)结合缓冲液平衡10个柱體(tǐ)积以上，或平衡至基線(xiàn)，洗去杂质，推荐流速為(wèi)100 cm/h。

3.4 洗脱：用(yòng)洗脱缓冲液洗10 ~ 20个柱體(tǐ)积，建议流速為(wèi)100 cm/h，收集的洗脱液应立即调节pH至稳定范围，并根据需要置换缓冲液。

3.5 NaOH再生：洗脱目的蛋白后的柱子用(yòng)蒸馏水清洗3 ~ 5个柱體(tǐ)积，并用(yòng)0.5 M NaOH再生3 ~ 5个柱體(tǐ)积，再用(yòng)蒸馏水清洗至中性，用(yòng)20%乙醇保存柱子，或进行下一次纯化。

3.6 HABA再生：用(yòng)脱硫生物(wù)素洗脱目的蛋白的，还可(kě)以用(yòng)HABA缓冲液再生，一般用(yòng)HABA的结合缓冲液洗15个柱體(tǐ)积，再用(yòng)结合缓冲液洗30个柱體(tǐ)积，然后可(kě)以用(yòng)20%乙醇保存柱子，或进行下一步纯化。HABA上柱后凝胶颜色会变為(wèi)红橙色，在结合缓冲液平衡后会恢复正常的白色，这种再生方式一般使用(yòng)體(tǐ)积会大些。

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