NRPB76 IMAC琼脂糖凝胶FF

发布日期:2023-05-26 阅读次数:8795

品  名:IMAC琼脂糖凝胶FF

英文(wén)名Immobilized Metal ion Affinity Chromatography NUPharose Fast Flow, IMAC NUPharose FF

目录号NRPB76L、NRPB76S(预装柱)

规  格10 mL, 20 mL,50 mL, 100 mL,500 mL, 1 L,10 L, 1 mL预装柱,5 mL预装柱,特殊规格订制

运  输2 ~ 30℃,常压、避光

贮  存20%乙醇,2 ~ 25℃

保质期5年


相关介绍: 

  螯合金属离子亲和层析(IMAC)琼脂糖凝胶FF具有(yǒu)螯合金属离子的能(néng)力,如螯合Cu2+、Zn2+、Co2+、Ni2+、Fe3+等,螯合金属离子后可(kě)用(yòng)于富含组氨酸、色氨酸、半胱氨酸的蛋白质纯化,其中最常见的是用(yòng)于融合了6-8个组氨酸标签的蛋白质纯化。与IDA琼脂糖凝胶FF相比,IMAC琼脂糖凝胶FF一般可(kě)以更牢固的结合金属离子,在纯化标签蛋白方面,有(yǒu)可(kě)能(néng)获得更高纯度的样品。


技术指标:

基质

6%交联琼脂糖

配基密度

≥40 μmol/ml

螯合载量

≥15μmol Ni2+/ml

平均粒径

~90 μm

最大流速

1200 cm/h

推荐流速

60-300 cm/h

pH稳定性

pH 2~14

0.3 MPa

载量

≥40 mg His-tag重组蛋白/ml(螯合Ni2+

使用(yòng)方法:

1、色谱柱装填

(1)所有(yǒu)需要用(yòng)到的材料的温度要与色谱操作的温度一样,液體(tǐ)最好做脱气处理(lǐ)。

(2)在柱子下端加入蒸馏水,以除去柱子中的空气,关闭柱子出口,在柱内保留少量的蒸馏水。

(3)将琼脂糖凝胶连续倒入柱子时,要用(yòng)玻璃棒的紧靠柱子内壁引流,以减少气泡的产生,让填料先自然沉降,建议柱床高度不超过20cm。

(4)柱压不超过0.3MPa,如果装柱系统中无法测柱压,则正常使用(yòng)流速填装。

(5)填装好的IMAC琼脂糖凝胶FF柱用(yòng)5个柱體(tǐ)积蒸馏水清洗,使用(yòng)的流速建议為(wèi)100cm/h。

2 螯合金属离子

(1)根据需要选择金属盐,一般配置0.1-0.2M金属盐溶液,常见的有(yǒu)CuSO4、ZnSO4、NiSO4、CoCl2等。注意金属盐溶液的pH以偏酸性為(wèi)宜(如pH4-6,Fe3+一般需要pH3),防止在螯合时pH上升产生沉淀。

(2)蒸馏水清洗后的IMAC琼脂糖凝胶FF用(yòng)1-3个柱體(tǐ)积金属盐溶液过柱螯合金属离子,然后用(yòng)5个柱體(tǐ)积以上的蒸馏水清洗层析柱,去除游离的金属盐溶液。

(3)用(yòng)5个柱體(tǐ)积以上的乙酸缓冲液(20mM 乙酸-乙酸钠,1M 氯化钠,pH4.0)清洗,去除结合不牢固的金属离子,减少在使用(yòng)过程的脱落。

(4)处理(lǐ)完后可(kě)用(yòng)结合缓冲液平衡层析柱,用(yòng)于目标蛋白的纯化。

3、纯化目标蛋白

(1)选择缓冲液:一般选用(yòng)pH6-8的结合缓冲液,常用(yòng)缓冲液有(yǒu)10-00mM 磷酸钠缓冲液、20-200mM Tris-HCl缓冲液等。在缓冲液中一般要加入0.15-0.5M的NaCl,以消除离子交换作用(yòng)。在初次使用(yòng)IMAC琼脂糖凝胶FF,推荐使用(yòng)50mM PBS(50 mM NaH2PO4,0.5M NaCl,NaOH调节pH 7.4)作為(wèi)结合缓冲液。

(2)样品处理(lǐ):样品的缓冲液应与所选结合缓冲液一致。為(wèi)保证缓冲液一致,可(kě)以在结合缓冲液中破碎细菌、或调解pH与结合缓冲液一致、或交换至结合缓冲液(常用(yòng)方法有(yǒu)透析、超滤、脱盐柱换液等)、或用(yòng)结合缓冲液稀释2-10倍等。样品上柱前应0.45μm过滤。

(3)平衡上样:螯合金属离子的IMAC琼脂糖凝胶FF用(yòng)结合缓冲液平衡5个柱體(tǐ)积,然后将样品上柱,上完样后,用(yòng)结合缓冲液平衡。

(4)洗脱优化:螯合金属离子的IMAC琼脂糖凝胶FF最常用(yòng)的洗脱方法為(wèi)增加咪唑浓度进行洗脱。初次实验不知道洗脱的咪唑浓度,可(kě)尝试不同的浓度洗脱,建议在结合缓冲液中分(fēn)别加入5mM、10mM、20mM、50mM、100mM、200mM、500mM咪唑(咪唑為(wèi)碱性物(wù)质,加入咪唑后需重新(xīn)调节pH),浓度从低到高,先后分(fēn)别洗脱和收集,通过SDS-PAGE電(diàn)泳等方法鉴定洗脱组份。

4、再生清洗

(1)多(duō)次使用(yòng)后或需要更换螯合的金属离子,必须将凝胶脱去金属离子再生。脱金属离子方法:用(yòng)5-10个柱體(tǐ)积蒸馏水淋洗柱子,再用(yòng)10个以上柱體(tǐ)积的100 mM EDTA淋洗柱子,再用(yòng)3-5个柱體(tǐ)积的0.5M NaCl洗掉残留的EDTA。

(2)多(duō)次使用(yòng)的柱子脱镍后一般需要清洗。清洗方法:用(yòng)0.1-1.0M NaOH反向清洗柱子,流速50cm/h,保持1-2h,能(néng)去除结合强的杂质,同时也能(néng)去除热源。NaOH清洗后应立即用(yòng)5个柱體(tǐ)积以上的蒸馏水清洗至中性,清洗后可(kě)按照螯合金属离子的方法重新(xīn)螯合金属离子。

5、保存

IMAC琼脂糖凝胶FF和螯合金属离子后的IMAC琼脂糖凝胶FF都可(kě)以用(yòng)20%乙醇保存,一般蒸馏水清洗后,用(yòng)3个柱體(tǐ)积20%乙醇清洗。20%乙醇清洗后的层析柱和凝胶可(kě)放置在2-25℃条件下保存。

中文(wén)名

英文(wén)简称

货号

规格

产品描述

重力预装柱

IMAC琼脂糖凝胶FF
     重力预装柱

Immobilized Metal ion
     Affinity Chromatography NUPharose Fast Flow pre-packed column

NRPB76S-Z11

1*1mL

1支*1ml

NRPB76S-Z41

4*1mL

4支*1ml

NRPB76S-Z15

1*5mL

1支*5mL

NRPB76S-Z25

2*5mL

2支*5mL

AKTA中压预装柱

IMAC琼脂糖凝胶FF
     中压预装柱

Immobilized Metal ion
     Affinity Chromatography NUPharose Fast Flow pre-packed column

NRPB76S-Y11

1*1mL

1支*1ml

NRPB76S-Y41

4*1mL

4支*1ml

NRPB76S-Y15

1*5mL

1支*5mL

NRPB76S-Y25

2*5mL

2支*5mL

填料

IMAC琼脂糖凝胶FF

Immobilized Metal ion Affinity Chromatography NUPharose Fast Flow

NRPB76L-10

10mL

1瓶*10ml

NRPB76L-20

20mL

1瓶*20ml

NRPB76L-100

100mL

1瓶*100ml

NRPB76L-500

500ml

1瓶*500ml

注:纽龙生物(wù)填料體(tǐ)积為(wèi)实际琼脂糖凝胶體(tǐ)积