NRPB61L Strep-Tactin2琼脂糖凝胶FF

相关介绍： 

Strep-Tactin 2 NUPharose FF是链霉亲和素的突变體(tǐ)（Strep-Tactin 2配基）和纽龙生物(wù)NUPharose琼脂糖凝胶偶联形成的和层析分(fēn)离介质，用(yòng)于分(fēn)离、纯化Strep II或Twin Strep标签蛋白。Strep II标签為(wèi)8个氨基酸的小(xiǎo)标签（WSHPQFEK），一般不影响融合后蛋白质的结构和功能(néng)，常用(yòng)于融合表达蛋白质的检测和纯化。Twin Strep标签為(wèi)两个Strep II串联的标签，相比Strep II标签，Twin Strep标签与Strep-Tactin 2配基的亲和力更高。

本产品的Strep-Tactin 2配基与Strep-Tactin配基相比，对Strep II标签的亲和力进一步提高，与生物(wù)素的亲和力大幅削弱。因而本产品能(néng)够更牢固的结合Strep II融合蛋白，在融合蛋白表达丰度较低时，相对捕获量更高，载量和得率更高。在洗脱方面，可(kě)以使用(yòng)生物(wù)素进行洗脱，比采用(yòng)昂贵的脱硫生物(wù)素洗脱更经济，且使用(yòng)后可(kě)采用(yòng)10~50 mM NaOH进行再生。本产品对Strep II标签具有(yǒu)高度特异性，一般只需一步纯化就能(néng)获得高纯度的蛋白质样品。

技术指标：

使用(yòng)方法：

1 推荐缓冲液

纯化Strep II标签蛋白

结合缓冲液：100 mM Tris-HCl，150 mM NaCl，1 mM EDTA，pH 8.0；

 　　　　　　或20 mM NaH₂PO₄，280 mM NaCl，6 mM KCl，pH 7.4

洗脱缓冲液：结合缓冲液 + 10~50 mM D-生物(wù)素；

再生缓冲液：10~50 mM NaOH

2 样品准备

上柱的样品应尽量保持与结合缓冲液一致。通常可(kě)用(yòng)透析、超滤、稀释等方法处理(lǐ)样品。并且上柱前应过0.45 μm滤膜或高速离心去除不溶物(wù)。

3 样品纯化

3.1 平衡：取适量的Strep-Tactin2琼脂糖凝胶FF装入合适的层析柱中，用(yòng)蒸馏水清洗5个柱體(tǐ)积去除保存液，再用(yòng)结合缓冲液平衡5个柱體(tǐ)积，建议流速為(wèi)100 cm/h。

3.2 上样：将准备好的样品上柱，建议流速為(wèi)20 ~ 100 cm/h，可(kě)根据实际结合情况选择流速，能(néng)获得较好的效果。

3.3 再平衡：上样后用(yòng)结合缓冲液平衡10个柱體(tǐ)积以上，或平衡至基線(xiàn)，洗去杂质，推荐流速為(wèi)100 cm/h。

3.4 洗脱：用(yòng)洗脱缓冲液洗10 ~ 20个柱體(tǐ)积，建议流速為(wèi)100 cm/h，收集的洗脱液应立即调节pH至稳定范围，并根据需要置换缓冲液。

3.5 NaOH再生：洗脱目的蛋白后的柱子用(yòng)蒸馏水清洗3 ~ 5个柱體(tǐ)积，并用(yòng) NaOH再生3 ~ 5个柱體(tǐ)积，再用(yòng)蒸馏水清洗至中性，用(yòng)20%乙醇保存柱子，或进行下一次纯化。

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