NRPB17L 糊精琼脂糖凝胶FF

相关介绍：

糊精琼脂糖凝胶FF是一种将糊精键合在琼脂糖凝胶微球上形成的生物(wù)亲和层析分(fēn)离介质，该产品保留了琼脂糖极好的亲水性及大网架结构，与生物(wù)活性大分(fēn)子有(yǒu)很(hěn)好的相容性，具有(yǒu)载量高，非特异性吸附少，流速快等特点。得益于糊精与麦芽糖结合蛋白（MBP）的高度特异性，通过一步糊精琼脂糖凝胶FF层析就可(kě)以获得非常高纯度的MBP，因此本产品主要用(yòng)于麦芽糖结合蛋白（MBP）、与麦芽糖结合蛋白融合的重组蛋白（MBP-tag）的分(fēn)离纯化。

技术指标：

使用(yòng)方法：

　　1. 装柱

　　1.1 根据分(fēn)离目标性质配制初始缓冲液（平衡液）和洗脱缓冲液。

　　1.2 将凝胶抽干，并用(yòng)蒸馏水洗涤2次去除保存的乙醇，用(yòng)蒸馏水配成匀浆并脱气。

　　1.3 将层析柱垂直固定，底端用(yòng)水或缓冲液润湿并保持一段液位。

　　1.4 用(yòng)玻璃棒引导匀浆沿着柱内壁一次性倒入柱内，使凝胶在柱内自由沉降。

　　1.5 连结好柱子顶端活动柱头，打开蠕动泵，让缓冲液用(yòng)使用(yòng)时操作流速流过5柱體(tǐ)积，再使用(yòng)1.5倍的操作流速流过5柱體(tǐ)积，调节适配柱头，使其尽量贴近胶面，最后用(yòng)2 ~ 3倍柱體(tǐ)积的缓冲液平衡柱子。

注意：

1)所有(yǒu)操作过程不能(néng)引入气泡，保证装胶的均匀度。

2)如无条件做1.2，填料层有(yǒu)气泡，可(kě)进行2次装柱，去除保存的乙醇和气泡。

3)乙醇等试剂配制的溶液需要脱气。

　　2. 平衡

　　将平衡缓冲液以操作流速平衡层析柱，观察检测器的变化，直到電(diàn)导、pH等参数不变。推荐的结合平衡缓冲液為(wèi)：20 mM Tris-HCl，200 mM NaCl, 1mM EDTA， pH 7.4。

　　3. 上样

　　切换转换阀进行上样，上样量根据样品的性质和层析介质的量进行选择，也可(kě)进行線(xiàn)性实验找到最佳上样量；样品的预处理(lǐ)：置换缓冲液，澄清过滤（0.45、0.22 μm）等。

　　4. 冲洗

　　用(yòng)2 ~ 3个柱體(tǐ)积的平衡缓冲液冲洗上样后的层析柱，观察检测器的变化，直到電(diàn)导、pH等参数不变，此时未交换的组分(fēn)被清洗出去。

　　5. 洗脱

　　一般推荐用(yòng)10 mM麦芽糖（可(kě)含缓冲成分(fēn)）进行洗脱。推荐的洗脱缓冲液為(wèi)：20 mM Tris-HCl,  200 mM NaCl,10 mM 麦芽糖, 1 mM EDTA, pH 7.4。

　　6. 再生

　　用(yòng)蒸馏水按操作流速冲洗3 ~ 5个柱體(tǐ)积，然后用(yòng)0.5mol/LNaOH清洗3-5个柱體(tǐ)积，接着再蒸馏水清洗3-5个柱體(tǐ)积，接着用(yòng)平衡液洗到平衡3 ~ 5个柱體(tǐ)积。

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