NRPB57L Ni-NTA琼脂糖凝胶FF

发布日期:2023-10-24 阅读次数:9664

品  名:Ni-NTA琼脂糖凝胶FF

英文(wén)名:Ni-NTA NUPharose FF

目录号:NRPB57L、NRPB57S(预装柱)

规  格:10 mL, 20 mL,50 mL, 100 mL,500 mL, 1 L,10 L, 1 mL预装柱,5 mL预装柱,特殊规格订制

运  输:2 ~ 30℃,常压、避光

贮  存:20%乙醇,2 ~ 30℃

保质期:5年


相关介绍: 

Ni-NTA琼脂糖凝胶FF以琼脂糖微球為(wèi)基质,通过活化偶联次氮基三乙酸(NTA),再螯合Ni2+。与亚氨基二乙酸(IDA)相比,具有(yǒu)更好的螯合剂、还原剂、碱性的耐受性,如样品中含有(yǒu)1-10mM EDTA或1-10mM β-巯基乙醇或5mM DTT,可(kě)正常纯化;在螯合镍的情况下,也可(kě)以用(yòng)0.1M NaOH清洗。


Ni-NTA琼脂糖凝胶FF主要用(yòng)于纯化带组氨酸标签(His-Tag)的重组蛋白。纯化原理(lǐ)是利用(yòng)重组蛋白组氨酸标签的咪唑环可(kě)与过渡金属Ni2+形成稳定的配位键,因此能(néng)特异、牢固、可(kě)逆地吸附于固定这些金属离子的基质,结合了His-Tag重组蛋白的Ni-NTA琼脂糖凝胶FF一般通过增加咪唑浓度进行竞争洗脱。


技术指标:

基质

6%交联琼脂糖

配基

NTA

配基密度

15 μmol/ml

平均粒径

~90 μm

最大流速

1200 cm/h

推荐流速

60-300 cm/h

pH稳定性

pH 3~12

0.5 MPa

载量

40 mg His-tag重组蛋白/ml 


使用(yòng)方法:

1、色谱柱装填

以下阐述与层析系统连接时,填料的色谱柱装填方法。

1.1所有(yǒu)需要用(yòng)到的材料的温度要与色谱操作的温度一样,液體(tǐ)最好做脱气处理(lǐ)。

1.2填料用(yòng)量计算:通过沉降定量填料體(tǐ)积,需要的沉降填料體(tǐ)积=柱體(tǐ)积×压缩比(也称压缩因子)。沉降體(tǐ)积是指填料在20%乙醇保存液中自然沉降完全读取的稳定體(tǐ)积。IDA NUPharose FF的压缩比為(wèi)1.15。為(wèi)使达到装柱比,可(kě)通过柱头下压的方法,也可(kě)以通过高流速压柱。

1.3填料清洗:将填料悬液充分(fēn)摇匀后量取相应體(tǐ)积,抽滤除去液體(tǐ),并用(yòng)约3倍填料體(tǐ)积的纯化水洗涤,重复3次,以除去保存液。

1.4装柱填料悬液准备:将填料转移到适当的容器中,加入适量的装柱液,制成50~75 v%的装柱填料悬液,使用(yòng)前搅匀。

1.5装填前准备:在清洗干净的层析柱下端加入装柱液,以除去下垫片及层析柱下端的空气,在柱内保留少量的蒸馏水,拧紧下堵头,调整柱子使其垂直于地面。

1.6装填:将搅匀后的填料悬液一次性缓慢倒入层析柱内(必要时使用(yòng)装柱器),為(wèi)避免引入气泡,应使之沿层析柱内壁自然流下。将所有(yǒu)填料加入后,用(yòng)装柱液将装柱器加满,拧紧装柱器上盖,将柱子与层析系统连接。

1.7压柱:使柱内填料自然沉降(或50~150 cm/h的低流速下沉降),待填料沉降完全后(填料与液體(tǐ)的界面清晰),去除装柱器,装上上柱头,并将柱头下降至界面处;通过高流速(推荐流速见下表,注意柱压不超过0.3 MPa),继续压柱至界面清晰稳定,标记界面稳定时的柱高。停泵,打开柱头上的阀门/堵头,关闭柱底的阀门/堵头,下压柱头至标记位置下方与压缩比对应的位置,旋紧柱头,装柱完成。装柱完成后,需用(yòng)高流速平衡柱内的填料。

2、上样

(1)缓冲液选择:一般选用(yòng)pH6-8的结合缓冲液,常用(yòng)缓冲液有(yǒu)10-00mM 磷酸钠缓冲液、20-200mM Tris-HCl缓冲液等。在缓冲液中一般要加入0.15-0.5M的NaCl,以消除离子交换作用(yòng)。在初次使用(yòng)Ni-NTA琼脂糖凝胶FF,推荐使用(yòng)50mM PBS(50 mM NaH2PO4,0.5M NaCl,NaOH调节pH 7.4)作為(wèi)结合缓冲液。

(2)样品处理(lǐ):样品的缓冲液应与所选结合缓冲液一致。為(wèi)保证缓冲液一致,可(kě)以在结合缓冲液中破碎细菌、或调解pH与结合缓冲液一致、或交换至结合缓冲液(常用(yòng)方法有(yǒu)透析、超滤、脱盐柱换液等)、或用(yòng)结合缓冲液稀释2-10倍等。样品上柱前应0.45μm过滤。

3、洗脱

(1)Ni-NTA琼脂糖凝胶FF最常用(yòng)的洗脱方法為(wèi)增加咪唑浓度进行洗脱。

(2)咪唑為(wèi)碱性,相应缓冲液配制后需要用(yòng)HCl进行调节pH。

(3)在初次使用(yòng)Ni-NTA琼脂糖凝胶FF,不知道洗脱的咪唑浓度,建议在结合缓冲液中分(fēn)别加入10mM、20mM、50mM、100mM、200mM、500mM咪唑,浓度从低到高,分(fēn)别洗脱和收集,通过SDS-PAGE電(diàn)泳等方法鉴定洗脱组份。

(4)有(yǒu)条件的也可(kě)以进行線(xiàn)性咪唑梯度洗脱,确定较佳洗脱条件。

4、在位清洗

在多(duō)次使用(yòng)后需要在位清洗,常用(yòng)方法為(wèi)先5个柱體(tǐ)积蒸馏水清洗,再用(yòng)1-3个柱體(tǐ)积50mM NaOH清洗10-20min,立即用(yòng)5个柱體(tǐ)积结合缓冲液(50mM PBS)清洗平衡。

导購(gòu)指南

中文(wén)名

英文(wén)简称

货号

规格

产品描述

重力预装柱

Ni-NTA琼脂糖凝胶FF重力预装柱

Ni-NTA NUPharose FF pre-packed column

NRPB57S-Z11

1*1mL

1支*1ml

NRPB57S-Z41

4*1mL

4支*1ml

NRPB57S-Z15

1*5mL

1*5mL

NRPB57S-Z25

2*5mL

2支*5mL

AKTA中压预装柱

Ni-NTA琼脂糖凝胶FF中压预装柱

Ni-NTA NUPharose FF pre-packed column

NRPB57S-Y11

1*1mL

1支*1ml

NRPB57S-Y41

4*1mL

4支*1ml

NRPB57S-Y15

1*5mL

1*5mL

NRPB57S-Y25

2*5mL

2支*5mL

填料

Ni-NTA琼脂糖凝胶FF

Ni-NTA NUPharose FF

NRPB57L-10

10mL

1瓶*10ml

NRPB57L-20

20mL

1瓶*20ml

NRPB57L-100

100mL

1瓶*100ml

NRPB57L-500

500ml

1瓶*500ml

注:纽龙生物(wù)填料體(tǐ)积為(wèi)实际琼脂糖凝胶體(tǐ)积