NRPB11L NHS-琼脂糖凝胶FF

相关介绍：

NHS-琼脂糖凝胶FF是一种将琼脂糖凝胶微球用(yòng)NHS活化形成的生物(wù)亲和层析分(fēn)离介质。该产品保留了琼脂糖极好的亲水性及大网架结构，与生物(wù)活性大分(fēn)子有(yǒu)很(hěn)好的相容性，具有(yǒu)载量高，非特异性吸附少，流速快等特点。本活化的琼脂糖凝胶能(néng)温和的与氨基基团反应，特别适合偶联抗體(tǐ)、链霉亲和素、酶、核酸等功能(néng)性生物(wù)大分(fēn)子。

技术指标：

应用(yòng)实例：

实验名称：NHS-琼脂糖凝胶FF偶联抗體(tǐ)。

实验步骤：

1. 配制抗體(tǐ)：取100 mg IgG加10 ml 偶联缓冲液(0.2 M NaHCO₃, 0.5 M NaCl, pH 8.3)溶解，留0.1 ml以便测定偶联效率。

2. 偶联反应：取10 ml NHS-琼脂糖凝胶FF，用(yòng)50 ml 1 mM HCl分(fēn)三次清洗去除保存液，清洗后立即加入抗體(tǐ)偶联溶液中，4℃，震荡反应6 小(xiǎo)时或者过夜，进行偶联反应。

3. 封闭：滤出反应液，用(yòng)50 ml偶联缓冲液清洗偶联后的凝胶，然后用(yòng)10 ml封闭缓冲液(0.2 M NaHCO₃, 0.5 M NaCl, 0.5 M 乙醇胺, pH 8.3)，室温震荡4 小(xiǎo)时（或者过夜）封闭未偶联的基团，封闭后用(yòng)20 ml蒸馏水洗干净即可(kě)。

4. 检测：偶联前后的反应液用(yòng)SDS-PAGE检测对比偶联效率，偶联好的填料根据配基特性测定功能(néng)和载量。

注意事项：

1. 如果配基的稳定性不了解，可(kě)以选择不同pH的缓冲液和温度，用(yòng)配基相应浓度的溶液0.5 ~ 1 ml，不加填料模拟偶联条件，观察溶液是否会产生沉淀。有(yǒu)沉淀产生对应的偶联效果就不好，可(kě)以稍微降低pH或温度，同时可(kě)以加5%左右的甘油或PEG保护蛋白，避免产生沉淀，总之对于任何配基最好能(néng)了解其溶解性及稳定性，避免实验失败导致损失。

2. 如果偶联的配基不稳定，可(kě)在摇床上4℃振摇偶联1 ~ 12小(xiǎo)时，以维持配基的活性。偶联配基后尽快清洗填料，避免在高pH 条件中，配基失活。

3. 更稳定的配基可(kě)以直接溶解于0.2 M碳酸氢钠，可(kě)适当提高温度，如室温，偶联时间则相应可(kě)缩短至1 ~ 2 小(xiǎo)时。

4. 偶联蛋白的较适pH為(wèi)7.5 ~ 9.0，在室温或4℃均可(kě)，提高温度能(néng)增加配基的偶联效率，根据蛋白的稳定性选择合适的pH 和温度。偶联蛋白溶液的浓度以5 ~ 15 mg/ml较佳。凝胶體(tǐ)积和配基溶液的體(tǐ)积比以1:0.5 ~ 1:2.0较佳。

5. 偶联的缓冲液可(kě)以是碳酸盐、硼酸盐和磷酸盐缓冲液，但绝对不能(néng)使用(yòng)氨基的缓冲體(tǐ)系，如Tris-HCl缓冲液。

6. 封闭的缓冲液一般使用(yòng)带氨基的小(xiǎo)分(fēn)子试剂，如乙醇胺、Tris等，pH在8 ~ 9室温封闭数小(xiǎo)时可(kě)完全封闭。推荐的封闭缓冲液為(wèi)0.5 M 乙醇胺，0.5 M NaCl，pH 8.3或0.1 M Tris-HCl，pH 8.5。

7. 在偶联中尽量使用(yòng)温和的混匀方式，如震荡、翻转、旋转等。如使用(yòng)磁力搅拌器或者机械搅拌，需要降低搅拌的速度，只要把填料能(néng)混匀完全悬浮起来即可(kě)，避免剧烈搅拌使凝胶微球破碎。

8. NHS-琼脂糖凝胶FF需现取现用(yòng)，避免时间过長(cháng)造成活性降低。

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