NRPB31L 苯基-琼脂糖凝胶FF

相关介绍： 

苯基-琼脂糖凝胶FF是一种将苯基键合在琼脂糖凝胶微球上形成的较强疏水性疏水层析分(fēn)离介质。该产品保留了琼脂糖极好的亲水性及大网架结构，与生物(wù)活性大分(fēn)子有(yǒu)很(hěn)好的相容性，具有(yǒu)载量高，非特异性吸附少，流速快等特点，广泛用(yòng)于具有(yǒu)一定疏水性能(néng)的蛋白质、多(duō)肽等生物(wù)大分(fēn)子实验室规模制备和生物(wù)制药、生物(wù)工程的工业化制备。

典型应用(yòng)如重组人粒巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)、粒细胞集落刺激因子(G-CSF)、人集落刺激因子(M-CSF)、表皮生成因子(EGF)的生产以及单克隆抗體(tǐ)的纯化。

技术指标：

使用(yòng)方法：

　　1. 装柱

　　1.1 根据分(fēn)离目标性质配制初始缓冲液（平衡液）和洗脱缓冲液。

　　1.2 将凝胶抽干，并用(yòng)蒸馏水洗涤2次去除保存的乙醇，用(yòng)蒸馏水配成匀浆并脱气。

　　1.3 将层析柱垂直固定，底端用(yòng)水或缓冲液润湿并保持一段液位。

　　1.4 用(yòng)玻璃棒引导匀浆沿着柱内壁一次性倒入柱内，使凝胶在柱内自由沉降。

　　1.5 连结好柱子顶端活动柱头，打开蠕动泵，让缓冲液用(yòng)使用(yòng)时操作流速流过5柱體(tǐ)积，再使用(yòng)1.5倍的操作流速流过5柱體(tǐ)积，调节适配柱头，使其尽量贴近胶面，最后用(yòng)2 ~ 3倍柱體(tǐ)积的缓冲液平衡柱子。

注意：

1)所有(yǒu)操作过程不能(néng)引入气泡，保证装胶的均匀度。

2)如无条件做1.2，填料层有(yǒu)气泡，可(kě)进行2次装柱，去除保存的乙醇和气泡。

3)乙醇等试剂配制的溶液需要脱气。

　　2. 平衡

　　将平衡缓冲液以操作流速平衡层析柱，观察检测器的变化，直到電(diàn)导、pH等参数不变。

　　3. 上样

　　切换转换阀进行上样，上样量根据样品的性质和层析介质的量进行选择，也可(kě)进行線(xiàn)性实验找到最佳上样量；样品的预处理(lǐ)：置换缓冲液，加盐，澄清过滤（0.45、0.22 μm）等。

　　4. 冲洗

　　用(yòng)2 ~ 3个柱體(tǐ)积的平衡缓冲液冲洗上样后的层析柱，观察检测器的变化，直到電(diàn)导、pH等参数不变，此时未交换的组分(fēn)被清洗出去。

　　5. 洗脱

　　疏水层析柱的洗脱可(kě)用(yòng)恒定洗脱、梯度洗脱或者阶跃洗脱，一般推荐降低盐浓度的梯度洗脱进行。亦可(kě)根据实际情况，添加有(yǒu)机溶剂进行洗脱。

　　6. 再生

　　用(yòng)蒸馏水按操作流速冲洗3 ~ 5个柱體(tǐ)积，接着用(yòng)平衡液洗到平衡3 ~ 5个柱體(tǐ)积。

　　若有(yǒu)失活蛋白质或脂类物(wù)质在再生时洗不掉，可(kě)用(yòng)在位清洗（CIP）除去。

　　7. 在位清洗(CIP)

　　对于强结合蛋白质或脂类物(wù)质，可(kě)采用(yòng)以下流程进行在位清洗：1 mol/L NaOH洗2个柱體(tǐ)积，8 mol/L尿素洗2个柱體(tǐ)积， 30%异丙醇洗2个柱體(tǐ)积，平衡缓冲液洗2个柱體(tǐ)积。

　　在位清洗可(kě)有(yǒu)效去除介质上的杂质，反向效果更佳。如需要去除内毒素热原，可(kě)以在50 cm/h速度下，1 mol/L NaOH清洗1 ~ 2 h。

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